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磁珠法提取試劑的原理與其成分簡(jiǎn)介
點(diǎn)擊次數:101 更新時(shí)間:2024-07-05

磁珠法核酸提取試劑盒原理是通過(guò)特殊條件快速裂解樣本,并利用磁珠顆粒特異性吸附核酸,經(jīng)過(guò)洗滌和洗脫,達到快速分離核酸的目的。試劑盒提取效率高,性能穩定,提取純化的核酸可用于酶切、反錄、PCR、 RI-PCR、 Southern blot等各種常見(jiàn)下游實(shí)驗。

磁珠法核酸提取試劑盒目前主要被用于多種類(lèi)型的生物樣本中病毒核酸的提取、富集、純化步驟,其處理后的產(chǎn)物用于臨床體外檢測使用。


試劑盒1.jpg



磁珠法提取試劑常見(jiàn)成分

SDS(十二烷基硫酸鈉)——性質(zhì):
1、陰離子表面活性劑:對人體微毒;
2、優(yōu)異的發(fā)泡劑:廣泛用于洗衣粉、牙膏、洗發(fā)水、滅火器;
3、易溶于熱水:當水溫高于8℃(≈)時(shí),SDS的溶解度隨水溫升高而急劇升高。當水溫升至70℃(≈),溶解度升高不明顯。


SDS(十二烷基硫酸鈉)——作用:
它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三級結構,使蛋白質(zhì)變性。在高溫下可以破壞蛋白質(zhì)與核酸的結合,促進(jìn)核酸釋放。

乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P 40 ):
NP-40是一種很溫和的非離子型去垢劑,1%濃度基本可以破壞掉細胞膜,而對核膜的破壞作用較弱。

弱陽(yáng)離子螯合樹(shù)脂(Chelex-100):
提取液里面bling,bling的小珠子是一種由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成的化學(xué)螯合樹(shù)脂,含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子,可螯合多價(jià)離子,特別是對高價(jià)金屬離子有很高的親和力和螯合作用。在低離子強度、堿性及煮沸的條件下,可以使細胞膜破裂,并使蛋白質(zhì)變性,通過(guò)離心除去Chelex顆粒,使其結合的物質(zhì)與DNA 分離。

知識點(diǎn):chelex-100在模板中殘留過(guò)多會(huì )影響PCR擴增

蛋白酶K(Protein K):
是一種從白色念珠菌分離出來(lái)的強力蛋白溶解酶,具有很高的比活性,是DNA提取的關(guān)鍵試劑。DNA提取中,主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白,使DNA游離在溶液中 。

聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100——曲拉通):
曲拉通X-100是一種非離子表面活性劑,在水中不解離,在溶液中穩定性高,不易受強電解質(zhì)無(wú)機鹽類(lèi)的影響,能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結合形成可溶性復合物;疏水端也能與膜蛋白的疏水區結合形成復合物,溶解于溶液中。

異硫氰酸胍(GITC):
強用力的蛋白質(zhì)變性劑,能迅速溶解蛋白質(zhì),導至細胞結構破碎,核蛋白由于其二級結構的破壞消失而迅速與核酸分離。GITC也是經(jīng)典RNA提取試劑TRIZOL的主要成分。

乙二胺四乙酸(EDTA):
是一種優(yōu)良的鈣、鎂離子螯合劑。抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時(shí)需要一定的金屬離子作輔基)。

Tris-Hcl:
三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液與鹽酸混勻后形成的緩沖劑,為裂解液及核酸提供一個(gè)比較適宜的環(huán)境。

小結:經(jīng)典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和鹽 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。鹽的作用,除了提供一個(gè)合適的裂解環(huán)境 (如 Tris),還包括抑制樣品中的核酸酶在裂解過(guò)程中對核酸的破壞 (如 EDTA)、維持核酸結構的穩定 (如 NaCl) 等。

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